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㈥ waters 2695-2489高效液相色谱的日常操作方法及故障维修处理

8 仪器设备的维护和保养 8.1 色谱柱日常维护 8.1.1 长期不使用HPLC应该将色谱柱从系统拆除拆除前应该充分平衡色谱柱一般为用甲醇或乙腈冲洗色谱柱40分钟以上。 8.1.2 每次开机时流速和柱压要逐渐加强突增压会使柱庆受到冲击引起紊乱产生空隙使柱头凹陷。 8.1.3 在注射样品前要使色谱系统平衡。若色谱柱长期保存未使用则刚装入HPLC系统时应以流量0.2mL/min平衡过夜注意断开检测器避免不必要的检测器耗损然后再以0.8mL/min流量平衡30分钟以上。以低流量缓慢的提高流速直到获得稳定的基线这样可以保证色谱柱的使用寿命。当然在分析结束时冲洗色谱柱及系统后停止流量时也应该从高流量逐步过渡到低流量直到流量为0。 8.1.4 不要把柱头拧得太紧过紧易损坏接头螺纹引起渗漏。拧螺丝时使用的搬手应短些不宜太长。不要把柱子放在有气流的地方或直接放在阳光下气流和阳光都会使柱子产生温度梯度造成基线漂移。若怀疑基线漂移是由温度梯度造成的可设法使柱子绝热例如用恒温炉或恒湿水套使之恒温也可用布或毛巾把柱子和接头包起来。8.1.5 若仪器用来作常规分析可配制一根专用柱这样有助于延长柱子的寿命。 8.1.6 若所注样品会污染柱子可用适当的溶剂几百毫升慢慢冲柱子过夜。使用再用流动相重新平衡柱子30分钟。 8.1.7 装卸、更换、贮存需挪动柱子时动作宜轻不使其受到碰撞以免柱床因震动而产生空隙或通道。 8.1.8 使用硅胶为基底的柱子流动相的pH值一般不应8或2pH8会使硅胶骨架溶解pH2则键合相化学键易剥离。 8.1.9 色谱柱在使用过程中柱压逐步升高可能有两个原因①柱子被污染或有固体析出造成流路堵塞②固定相颗粒被碎或骨架被溶解。解决的办法①在分析柱前加一根短保洗柱内径 4×50mm里面的填料应与分析柱相同②避免使用碱性强的流动相③如果柱头部分被污染可将柱头部分变色的固定相刮去另加一些新的作为补充。 8.1.10 含盐的流动相的冲洗方法每天操作结束后先用纯化水或含甲醇5%最高浓度在20%以下的水冲洗时间约2030分钟再用高浓度甲醇含甲醇85%以上溶液冲洗约3060分钟(注不能直接用有机溶液冲洗盐类易析出堵塞色谱柱造成色谱柱永久性损坏所用水最好是重蒸馏的水必须抽滤和脱气)。8.1.11 不含盐的流动相的冲洗方法每天操作结束后先用流动相冲洗约1015分钟再用含5%甲醇的水冲洗1020分钟。最后用高浓度甲醇含甲醇85%以上溶液或纯甲醇冲洗时间约2030分钟注不能直接用纯水冲洗易造成流动停止。 8.1.12 柱要加标签新旧分开不要放大温差大的地方。 8.2 e2695分离单元的维护 8.2.1 流动相使用不要超过二天最好每天新鲜配制以免微生物的生长。 8.2.2 腐蚀性溶剂或缓冲液在泵内存放不可过夜否则溶剂会对泵起腐蚀作用。使用腐蚀性物质后要冲洗先用水后用甲醇。 8.2.3 进行阀注射孔的导管内端是一个聚四氟乙烯材料做的钵形垫圈或平垫圈作用是保证样品液全部注入系统而不外汇。导管不宜审批权得太紧否则垫圈被挤压过度而封死无法进样。进样阀的通道十分微细稍有脏物即易堵塞所以样品预先处理很重要。样品一定要溶解完全同时避免注射浓溶液以免残留液在进样阀内析出结晶引起堵塞使系统压力异常上升。 8.2.4 系统短期不使用应该在每次使用后冲洗系统30分钟以上。 8.2.5 注射器中的气泡快速有效排除方法可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除气泡后注射器中保留少量溶剂做“purge injector”小心安装上再做几次“purge injector”观察没有气泡即可。其他方法可以在“purge injector”开始后、注射器杆向上时拧掉下边螺丝上下抽推排除气泡但手动排泡过程要在“purge injector”结束前完成。溶剂用甲醇较好不用同时拧掉上方注射器。 8.3 检测器的维护 8.3.1 异常峰和噪音对于异常峰和方形峰以及噪声异常增大现象表示光源灯已到极限应更换并检查上述现象是否消失。若流动相被污染也会出现异常峰和方形峰的情况。流动相内混有气泡可出现流动池内有气泡的现象气泡去除方法一面由泵送液。一面用手指紧压流动池出口的连接管使池内增压如此反复34次气泡即可冲走。注意不应使流动池压力增加太多以免破裂。流动池漏液或池出口反压过大环境温度起落大如直接有风吹在示差折光检测器上都可能发生流动池漏液池出口反压过大及温差大的现象。若流动池出口反压太大可检查流路是事畅通或更换内径粗一些的出口连接管。 8.3.2 基线漂移样品池、参比池被污染可用溶剂清洗检测池但所用溶液和原来使用的流动相互溶或采用溶剂过度的方式。若池子太脏可用10%HNO3和蒸馏水清洗。另外色谱柱污染不断有杂质从柱上洗下也会引起检测器讯号的噪音和漂移。环境温度变化也会引起漂移。